第0天：細(xì)胞接種

→根據(jù)下表在V mL細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)種子細(xì)胞

每個(gè)孔、盤(pán)子或燒瓶的數(shù)量

*對(duì)于特定的細(xì)胞類(lèi)型或懸浮細(xì)胞，請(qǐng)參考完整的方案。

第1天：轉(zhuǎn)染

→在血清存在的情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染

→僅使用jetPRIME®緩沖液

→以60-80%的融合率轉(zhuǎn)染細(xì)胞

每個(gè)孔、盤(pán)子或燒瓶的數(shù)量

第2-3天：測(cè)量基因表達(dá)

優(yōu)化方向：

(1)測(cè)試不同的DNA量：X、0.5X和1.5X。

(2)測(cè)試不同的DNA/jetPRIME®比例，1:2至1:3。

每個(gè)孔、盤(pán)子或燒瓶的數(shù)量

對(duì)于HEK-293和HeLa細(xì)胞，可以將DNA量減少到0.5倍，并使用1:2 DNA/jetPRIME®比例。

提高敏感細(xì)胞細(xì)胞活力的技巧：

（1）轉(zhuǎn)染后4小時(shí)更換培養(yǎng)基。

（2）將DNA量減少到0.5倍，同時(shí)保持之前使用的DNA/jetPRIME®比例。

（3）在較早的時(shí)間點(diǎn)（例如轉(zhuǎn)染后24小時(shí)而不是48小時(shí)）分析轉(zhuǎn)染。

（4）檢查靶基因是否影響細(xì)胞活力。

良好的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)踐：

（1）適當(dāng)儲(chǔ)存jetPRIME®（5±3°C）。

（2）確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前傳代兩次以上且少于20次。

（3）丟棄過(guò)度流暢的細(xì)胞。

（4）定期檢查支原體污染情況。

（5）使用報(bào)告基因來(lái)建立和優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。

（6）血清質(zhì)量可能會(huì)嚴(yán)重影響轉(zhuǎn)染效率。購(gòu)買(mǎi)新一批血清時(shí)或胰蛋白酶檢查細(xì)胞活力以及轉(zhuǎn)染效率。