用于WB，IP，IHC，IF，ChIP，F(xiàn)C實(shí)驗(yàn)的抗體有哪些區(qū)別？今天我們一起學(xué)習(xí)一下吧！

WB（western blot，蛋白質(zhì)印跡）：是生命科學(xué)領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)中一種非常常見(jiàn)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，其原理是先利用SDS-PAGE將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，接著將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后再利用抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測(cè)。通過(guò)分析條帶大小和顯色信號(hào)獲得目標(biāo)蛋白質(zhì)在細(xì)胞或組織樣本中的表達(dá)情況。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中由于蛋白質(zhì)在電泳前進(jìn)行了加熱變性，破壞了保持蛋白質(zhì)二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的氫鍵，從而使得蛋白質(zhì)發(fā)生了線性化，需要使用識(shí)別線性抗原表位的抗體。因此WB抗體一般選用人工合成多肽作為抗原制備出來(lái)的抗體。

IHC(immunohistochemical，免疫組化)：是通過(guò)抗原抗體特異性免疫反應(yīng)和化學(xué)/熒光呈色反應(yīng)，利用標(biāo)記抗體對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原進(jìn)行研究的技術(shù)。在進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要將組織或者細(xì)胞進(jìn)行固定，以維持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和天然狀態(tài)下的一致，確保組織細(xì)胞抗原特異性的穩(wěn)定。但化學(xué)物質(zhì)的固定會(huì)使蛋白質(zhì)變性，與天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)會(huì)存在有一定的區(qū)別，而又不同于WB中加熱變性變成線性的結(jié)構(gòu)。

免疫組化抗體識(shí)別的是未經(jīng)加熱變性處理的抗原表位，有的屬于構(gòu)象型，有的屬于線性的，構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，加熱變性會(huì)消失，而線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和變性后的蛋白都含有。因此在做IHC/IF實(shí)驗(yàn)中，最合適是用重組蛋白作為抗原制備出來(lái)的抗體，除此之外也可以是人工合成多肽作為抗原制備出來(lái)的抗體。如果所用的抗體識(shí)別的是線性表位(例如識(shí)別蛋白上連續(xù)的幾個(gè)氨基酸)那么這種抗體則可以同時(shí)用于IHC和WB，而如果抗體識(shí)別的是構(gòu)象表位，則只能用于IHC。

IP(Immunoprecipitation，免疫沉淀)：是通過(guò)抗原抗體特異性反應(yīng)來(lái)純化富集樣品中的目的蛋白的一種方法。一般情況下是使目的蛋白與其對(duì)應(yīng)的抗體(protein A/G)形成免疫復(fù)合物沉淀而被收集。根據(jù)檢測(cè)目標(biāo)的不同可以將IP技術(shù)分為以下3種：CHIP、RIP、Co-lP。CHIP是利用IP技術(shù)富集蛋白后檢測(cè)與其結(jié)合的DNA的量；RIP是檢測(cè)與其結(jié)合的RNA的量；Co-IP則是檢測(cè)與其結(jié)合的蛋白質(zhì)的量。

免疫沉淀是用抗體去識(shí)別結(jié)合自然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，因此做IP實(shí)驗(yàn)時(shí)抗體最好選擇由天然蛋白作為抗原制備出來(lái)的抗體，當(dāng)然也可以選擇由重組蛋白作為抗原制備的抗體，注意最好不要選擇由人工合成多肽作為抗原制備的抗體，因?yàn)檫@種抗體識(shí)別的位點(diǎn)有可能包裹在蛋白內(nèi)部而無(wú)法識(shí)別。

FC(flowcytometry，流式細(xì)胞術(shù))：是以IF為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的一種專(zhuān)門(mén)的細(xì)胞分析技術(shù)，主要用于細(xì)胞的分選。流式細(xì)胞中分為兩種，一種是將細(xì)胞固定之后的流式，在選用抗體時(shí)保持與IF/IHC 一致即可；另外一種是活細(xì)胞的流式，這種流式最好采用由重組蛋白作為抗原制備出來(lái)的抗體或者采用由天然蛋白作為抗原制備的抗體。

在做流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中由兩種標(biāo)記方法，直接標(biāo)記法和間接標(biāo)記法。使用直接標(biāo)記法時(shí)應(yīng)選擇帶有熒光標(biāo)記的一抗；如果研究的蛋白沒(méi)有直接標(biāo)記的一抗，則需使用間接標(biāo)記法，在使用間接標(biāo)記法的過(guò)程中需注意要同時(shí)使用可識(shí)別靶標(biāo)抗原一抗和偶聯(lián)熒光染色的二抗。

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