以下是百奧益康通用型試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作流程及關(guān)鍵注意事項(xiàng)(以細(xì)胞培養(yǎng)類試劑為例，適用于多數(shù)產(chǎn)品線)
一、百奧益康試劑盒操作前準(zhǔn)備
1. 試劑復(fù)溫/解凍
- 細(xì)胞培養(yǎng)基、血清等置于 2-8℃緩慢解凍(24小時(shí)) 或 37℃水浴快速解凍(≤15分鐘)，解凍后立即使用。
- 凍干粉試劑(如細(xì)胞因子)用 指定緩沖液復(fù)溶，輕柔渦旋，避免泡沫。
2. 設(shè)備預(yù)冷/消毒
- 超凈臺紫外滅菌30分鐘，移液器、離心管等表面酒精擦拭。
- 磁珠分選類試劑需提前將 分離架置于4℃預(yù)冷。
二、百奧益康試劑盒核心操作流程
> 以"細(xì)胞刺激/培養(yǎng)試劑盒"為例
1. 樣本處理
- 分離PBMC或靶細(xì)胞，用 預(yù)冷PBS洗滌2次(300g, 5分鐘)，重懸于百奧益康專用基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
2. 試劑配制
- 按說明書比例配制工作液(例：刺激因子母液+培養(yǎng)基稀釋)，現(xiàn)配現(xiàn)用。
- 關(guān)鍵點(diǎn)： 含蛋白組分避免反復(fù)凍融；促生長因子需避光。
3. 細(xì)胞刺激/培養(yǎng)
- 將細(xì)胞懸液加入預(yù)鋪工作液的培養(yǎng)板(密度：5×10?/mL)，輕搖混勻。
- 培養(yǎng)條件：37℃, 5% CO?, 95%濕度，定期觀察形態(tài)。
4. 結(jié)果檢測
- 收集細(xì)胞：72小時(shí)后離心(300g, 10分鐘)，取上清測因子分泌(ELISA)或細(xì)胞裂解液測通路蛋白(WB)。
三、百奧益康試劑盒磁珠分選類試劑盒特殊步驟（如免疫細(xì)胞分選）
1. 抗體標(biāo)記
- 每10?細(xì)胞加 10μL抗體混合液，4℃避光孵育 10分鐘。
2. 磁珠結(jié)合
- 加 5μL磁珠/10?細(xì)胞，混勻后4℃孵育 15分鐘。
3. 磁性分離
- 置分離柱于磁場中，上樣后收集流穿液(目標(biāo)細(xì)胞)，用緩沖液沖洗3次。
四、百奧益康試劑盒關(guān)鍵注意事項(xiàng)
| 步驟 | 致命錯(cuò)誤規(guī)避 |
| 試劑配制 | 勿用含Ca²?/Mg²?緩沖液稀釋酶制劑 |
| 細(xì)胞接種 | 禁止吹打產(chǎn)生氣泡（導(dǎo)致缺氧死亡） |
| 磁珠分選 | 分選柱勿流干（立即補(bǔ)加緩沖液） |
| 凍存保存 | 分裝后液氮速凍，避免反復(fù)凍融 |
五、百奧益康試劑盒故障排查速查表
- 細(xì)胞活性低 → 檢測試劑pH(標(biāo)準(zhǔn)7.2-7.4)及內(nèi)毒素(<0.1EU/mL)
- 分選純度不足 → 確認(rèn)抗體用量及孵育溫度(嚴(yán)格4℃)
- 試劑沉淀 → 37℃溫浴5分鐘并渦旋(某些生長因子需過濾除菌)
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更新時(shí)間：2025-08-11
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