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離心柱法提取DNA的實(shí)驗(yàn)步驟與注意事項(xiàng)有哪些？
2023-10-12
離心柱上有硅膠濾膜，在高鹽低pH條件下，核酸能結(jié)合到硅膠膜上，而蛋白質(zhì)和其他代謝產(chǎn)物被洗脫；后續(xù)改變反應(yīng)條件到低鹽高pH來洗脫純化DNA。用離心柱法來提取DNA，得到的DNA質(zhì)量好，純度和濃度較高。那么離心柱法提取DNA的實(shí)驗(yàn)步驟與注意事項(xiàng)有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、實(shí)驗(yàn)步驟1.平衡液預(yù)處理取一個(gè)新的吸附柱放在收集管中，懸空加入100μL的平衡液至離心柱中，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將離心柱放回收集管中，備用。2.處理材料（1）如提取材料為血液，...
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如何制備蛋白質(zhì)電泳凝膠？
2023-10-12
你知道該如何制備蛋白質(zhì)電泳凝膠嗎？讓我們一起來看看吧！一、制備方法1.根據(jù)垂直電泳槽說明書安裝玻璃板，確定需配制分離膠的濃度和體積，配制所需分離膠；2.迅速將分離膠注入兩玻璃板間隙中，留出灌注積層膠所需空間（梳子的齒長再加1cm，用滴管小心地在分離膠上覆蓋一層0.1%SDS（當(dāng)丙烯酰胺濃度≤8%時(shí)）或異丁醇或水（當(dāng)丙烯酰胺濃度≥10%時(shí)），覆蓋層可防止氧擴(kuò)散進(jìn)入凝膠而抑制聚合反應(yīng)。將凝膠垂直置于室溫下；3.分離膠聚合wan全后，倒出覆蓋層液體，用去離子水洗滌凝膠頂部數(shù)次以除去...
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磁珠法提取DNA的實(shí)驗(yàn)步驟與注意事項(xiàng)有什么？
2023-10-11
磁珠法核酸純化技術(shù)采用了納米級(jí)磁珠微珠，這種磁珠微珠的表面標(biāo)記了一種對(duì)核酸有吸附作用的特定活性官能團(tuán)，能同核酸發(fā)生吸附反應(yīng)，從而達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的，進(jìn)而獲得純化的核酸。那么磁珠法提取DNA的實(shí)驗(yàn)步驟與注意事項(xiàng)有什么呢？讓我們一起來看看吧！一、步驟1、樣本處理：核酸必須從細(xì)胞或其他生物物質(zhì)中釋放出來。（1）植物組織：液氮研磨或在特殊裂解液中電動(dòng)勻漿；（2）動(dòng)物組織：液氮研磨或裂解液中手動(dòng)/電動(dòng)勻漿；（3）血細(xì)胞：應(yīng)用紅細(xì)胞裂解液處理；（4）細(xì)胞：胰酶處理或蛋白酶K處理。2...
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PCR純化回收的步驟與注意事項(xiàng)有哪些？
2023-10-11
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物中通常會(huì)含有過量的引物、dNTP、酶等，這些會(huì)對(duì)后續(xù)核酸序列測(cè)定、酶切、載體構(gòu)建等產(chǎn)生影響，通過PCR純化回收可獲取純的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物。那么PCR純化回收的步驟與注意事項(xiàng)有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、步驟1.在紫外投射儀或凝膠成像儀上，用刀片切取包含目的條帶的瓊脂糖凝膠并稱重；2.一般以0.1g膠加入100μl溶膠液的比例（具體根據(jù)試劑盒說明添加），按凝膠實(shí)際重量加入溶膠液，水浴鍋中55℃溶膠（期間可緩慢震動(dòng)Ep管，將膠溶解wan全）；3.回收試劑盒中會(huì)...
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Trizol法提取RNA的原理與步驟是什么？
2023-10-10
RNA是一種核酸分子，在生物學(xué)中扮演著重要的角色。在細(xì)胞內(nèi)，RNA不僅具有轉(zhuǎn)錄和翻譯的功能，而且在調(diào)控基因表達(dá)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)以及病理機(jī)制等方面也發(fā)揮著重要的作用。Trizol法是目前普遍使用的RNA提取方法，那么Trizol法提取RNA的原理與步驟是什么？讓我們一起來看看吧！一、Trizol法的實(shí)驗(yàn)原理TRIZOL試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑，它在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性。試劑主要成分為異硫氰酸和苯酚，其中異硫氰酸肌可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使...
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Trizol法提取RNA的注意事項(xiàng)與常見問題有哪些？
2023-10-10
Trizol法是目前普遍使用的RNA提取方法，那么Trizol法提取RNA有哪些注意事項(xiàng)和常見問題呢？讓我們一起來看看吧！一、Trizol法提取RNA的注意事項(xiàng)在使用TRIZOL的時(shí)候要帶手套和眼罩，避免接觸到皮膚和衣服，使用化學(xué)通風(fēng)櫥，防止蒸汽吸入。從少量樣品（1-10mg組織或102-104細(xì)胞）中提取RNA時(shí)可加入少許糖原以促進(jìn)RNA沉淀。例如加800mlTRIzol勻漿樣品，沉淀RNA前加5-10μgRNase-free糖原。糖原會(huì)與RNA一同沉淀出來，糖原濃度不高于...
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常見的DNA純化方法
2023-10-10
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，提純DNA樣本是十分常見的步驟，下面給大家介紹幾種常見的DNA純化方法，一起來看看吧！一、苯酚-氯仿抽提法苯酚和氯仿是常見的有機(jī)溶劑，一般可以用來將蛋白雜質(zhì)從DNA樣本里去除?；驹硎?，有機(jī)溶劑會(huì)使雜質(zhì)蛋白變性，并將雜質(zhì)蛋白留在有機(jī)溶劑層，而DNA分子是有水溶性的，所以會(huì)進(jìn)入水溶液層。這樣DNA和雜質(zhì)蛋白就被分開了。這個(gè)方法的好處是便宜有效，特別是在提取基因組DNA時(shí)，要去掉許多從細(xì)胞裂解液中帶來的蛋白，苯酚法十分好用但苯酚和氯仿是有毒溶劑，而且有可能會(huì)...
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RNA提取的注意事項(xiàng)
2023-10-10
RNA是目前發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)生物功能豐富多樣的生物大分子，同時(shí)是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時(shí)代的重要手段。那么你知道RNA提取的注意事項(xiàng)都有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、如何保存提取出的RNA？提取后溶解于RNase-freeWater中，RNA樣品建議立即進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)，如需儲(chǔ)存，建議分裝保存于-80℃。避免多次取用樣品，反復(fù)凍融。二、為什么提取的RNA有降解？1.使用的組織材料不新鮮。提取RNA應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r組織材料用液...
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