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為何酶不能保存在-80°C冰箱？
2025-02-07
生物實(shí)驗(yàn)室的寶子們，平時(shí)做PCR實(shí)驗(yàn)，一定離不開(kāi)各種酶的使用，而酶一般都保存在-20°C的冰箱中。實(shí)驗(yàn)室除了-20℃冰箱，肯定都還有-80℃的冰箱，那為什么我們要選擇-20℃，而不選擇溫度更低的-80°C的呢?大家有思考過(guò)這個(gè)問(wèn)題嗎?酶在-80°C下保存是為了維持其活性和穩(wěn)定性，但并非所有酶都需要如此低溫保存。以下是專業(yè)解讀：1.酶的特性溫度敏感性：酶是蛋白質(zhì)，高溫易導(dǎo)致變性，低溫則能減緩降解和變性速度。長(zhǎng)期保存需求：-80°C能有效抑制酶活性中心的破壞和蛋白水解酶的降解。2...
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懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
2025-02-06
一、懸浮細(xì)胞都有什么？懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞是指在體外培養(yǎng)時(shí)不依賴于支持物表面，而是在培養(yǎng)液中以懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)的細(xì)胞。這類細(xì)胞通常來(lái)源于血液、淋巴組織，例如某些腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞。懸浮細(xì)胞的特點(diǎn)是細(xì)胞呈圓形，一般不貼于支持物上，易于大量繁殖。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞類型中，懸浮細(xì)胞可以呈單個(gè)細(xì)胞或細(xì)小的細(xì)胞團(tuán)生長(zhǎng)。以下是一些常見(jiàn)的懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞類型：小鼠腹水瘤S180小鼠骨髓瘤NS1和SP2/0人造血系腫瘤細(xì)胞U937、HL60、K562人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞HL-60小鼠白血病細(xì)胞WEHI-3人...
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慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞全流程詳解
2025-02-06
慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞全流程詳解一、細(xì)胞種板將細(xì)胞種在12孔板中，每孔1.5×10^5個(gè)細(xì)胞。每孔加入1mlwan全培養(yǎng)基。二、病毒感染1.待細(xì)胞生長(zhǎng)至30%～50%時(shí)開(kāi)始轉(zhuǎn)染。2.將病毒從冰箱取出，放在冰上融化。3.打開(kāi)生物安全柜，關(guān)閉風(fēng)機(jī)，戴好帽子和口罩。4.棄去培養(yǎng)基，用PBS洗三次。5.每孔加入500ulwan全培養(yǎng)基。6.根據(jù)公式計(jì)算每孔所需病毒量：每孔病毒量（μL）=MOIx細(xì)胞數(shù)/病毒滴度（TU/mL）×1000。7.4小時(shí)后，再向孔板中加入500ulwan全培養(yǎng)基...
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小分子蛋白的WB該如何？
2025-01-23
WB（WesternBlot）是一種常用的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于檢測(cè)和分析蛋白樣品中特定蛋白質(zhì)的存在和表達(dá)水平。它通過(guò)將樣品中的蛋白質(zhì)分離并轉(zhuǎn)移到膜上，然后使用特定的抗體識(shí)別目標(biāo)蛋白，并通過(guò)化學(xué)或免疫檢測(cè)方法來(lái)可視化這些蛋白質(zhì)。WesternBlot技術(shù)通常包括樣品制備、SDS-PAGE電泳分離、蛋白轉(zhuǎn)印、封閉和抗體檢測(cè)、曝光顯影等步驟。目前WB被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究中，用于研究蛋白質(zhì)表達(dá)、翻譯后修飾以及蛋白質(zhì)相互作用等。圖1.WB流程圖在日常實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，小分子蛋白是非常常...
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明明凍存的時(shí)候細(xì)胞長(zhǎng)得好好的，怎么一復(fù)蘇就完啦？
2025-01-21
不知道大家是否會(huì)遇到細(xì)胞凍存的時(shí)候狀態(tài)非常不錯(cuò)，結(jié)果等到需要用到該細(xì)胞的時(shí)候怎么也復(fù)蘇不起來(lái)的情況啊？或許可能是凍存細(xì)胞的時(shí)候出現(xiàn)了什么差錯(cuò)？一.細(xì)胞凍存的原則：慢凍，細(xì)胞在冷凍過(guò)程中，如果降溫過(guò)快，會(huì)形成大的冰晶，這些冰晶會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。詳細(xì)版本見(jiàn)《細(xì)胞凍存的原理是什么？》二.凍存液的配置：常用配置比例：培養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1適用于大多數(shù)細(xì)胞系，能夠保證細(xì)胞在凍存過(guò)程中有較高的存活率。血清:DMSO=9:1適用范圍：適用于需要長(zhǎng)時(shí)間保存或者具有特別...
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CCK8實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
2025-01-20
CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析?；驹恚涸撛噭┲泻蠾ST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liu酸2甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增...
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CCK8實(shí)驗(yàn)一文就懂！
2025-01-20
前面我們?cè)谖恼隆稙槭裁碈CK8鏡下趨勢(shì)是對(duì)的，測(cè)出來(lái)的OD值卻不對(duì)？？》中cue到過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)，那么CCK8具體到底是什么呢，讓我們今天一起詳細(xì)了解下吧~一、CCK-8實(shí)驗(yàn)的基本定義與原理CCK-8實(shí)驗(yàn)是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究的細(xì)胞增殖和毒性檢測(cè)方法。其基本原理在于利用細(xì)胞內(nèi)的代謝酶將無(wú)色的CCK-8試劑（CellCountingKit-8）中的WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）還原為具有高...
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流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn)及應(yīng)用
2025-01-17
一、流式細(xì)胞術(shù)特點(diǎn)速度快:流式細(xì)胞術(shù)是一種快速的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，通過(guò)對(duì)單個(gè)細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行逐個(gè)檢測(cè)，測(cè)量速度可達(dá)每秒數(shù)千甚至上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。靈敏度高:每個(gè)細(xì)胞只需帶有1000~3000個(gè)熒光分子，流式細(xì)胞術(shù)就能夠準(zhǔn)確檢測(cè)出來(lái)。這種高靈敏度的特性使得流式細(xì)胞術(shù)成為研究復(fù)雜生物系統(tǒng)和細(xì)胞內(nèi)分子水平變化的重要工具。多參數(shù):可應(yīng)用于多參數(shù)分析，通過(guò)多色熒光染色同時(shí)對(duì)單個(gè)細(xì)胞或生物顆粒的多種特征進(jìn)行細(xì)致分析。這種高度精密的方法使研究人員能夠深入研究細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)和功能，為疾病診斷和治療提供重要...
服務(wù)熱線：022-66387942
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