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無血清培養(yǎng)基配方、使用方法

2024-09-26 一、前言細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在生命科學(xué)研究領(lǐng)域是must的。在科研上，細(xì)胞培養(yǎng)基（medium）一般都會加入血清（Serum）來補(bǔ)充蛋白質(zhì)（protein）、生長因子（growthfactor）或其他營養(yǎng)物質(zhì)（nutrients）等，大部分細(xì)胞培養(yǎng)會選擇使用胎牛血清（fetalbovineserum,FBS）。近年來也陸續(xù)有多樣的血清種類，例如：人類血小板生長因子（platelet-richplasma,PRP）、小牛血清（bovinegrowthserum,BGS）等，中科百抗自研...

細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程

2024-09-26 一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。二、取材在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的shou次培養(yǎng)稱為原代...

RNA酶保護(hù)試驗(yàn)方法優(yōu)缺點(diǎn)

2024-09-26 一、工作原理RNA酶保護(hù)法（RNaseProtectionAssay，RPA，以下簡稱RPA），是近十年發(fā)展起來的一種全新的mRNA定量分析方法?；驹恚簩?biāo)記的特異RNA探針（32P或生物素）與待測的RNA樣品液相雜交，標(biāo)記的特異RNA探針按堿基互補(bǔ)的原則與目的基因特異性結(jié)合，形成雙鏈RNA；未結(jié)合的單鏈RNA經(jīng)RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待測目的基因與特異RNA探針結(jié)合后形成雙鏈RNA，免受RNA酶的消化，故該方法命名為RNA酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)。二、RPA法優(yōu)...

選擇來源安全、可追溯的新生牛血清至關(guān)重要

2024-09-26 新生牛血清是從出生0天至1周內(nèi)或0至30天的新小牛中采集的血液制品，主要用于細(xì)胞培養(yǎng)和疫苗生產(chǎn)等生物制藥領(lǐng)域。在選購時應(yīng)該關(guān)注血源的可追溯性、質(zhì)量認(rèn)證以及適用性；操作時應(yīng)注意血清的采集、儲存條件和逐步適應(yīng)訓(xùn)練等。新生牛血清的選購指南：1.血源可追溯性：選擇來源安全、可追溯的新生牛血清至關(guān)重要。市面上存在較多以假亂真的產(chǎn)品，因此科研工作者需要對血清的真實(shí)產(chǎn)地、來源進(jìn)行充分了解和鑒別。2.質(zhì)量認(rèn)證：通過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和多項(xiàng)性能測試。例如，某些特優(yōu)級胎牛血清會有多達(dá)70項(xiàng)質(zhì)量測試，...

生物制藥中殘留DNA檢測試劑盒推薦

2024-09-25 一、前言生物制藥是利用生物技術(shù)從組織、細(xì)胞等生物體中分離出有效成分后制備出的用于預(yù)防、治療和診斷的制品，如疫苗，重組蛋白藥等。目前，已開發(fā)出多種生產(chǎn)用的細(xì)胞系，如CHO細(xì)胞、大腸桿菌、VERO細(xì)胞等細(xì)胞系。然而這些通過大腸桿菌，CHO細(xì)胞等培養(yǎng)生產(chǎn)的生物制劑會含有宿主細(xì)胞殘留DNA等特定的雜質(zhì)，殘留DNA會引發(fā)潛在的安全問題（如潛在致瘤性、傳染性，甚至增加免疫源性或?qū)е峦蛔儯?，所以相關(guān)的法律法規(guī)相繼出臺，以對生物制品中外源宿主DNA殘留量進(jìn)行嚴(yán)格把控。如WHO和美國FDA現(xiàn)行...

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞（E.coli DH5α）制備

2024-09-25 一、DH5αDH5α是大腸桿菌(Escherichiacoli)的一種感受態(tài)細(xì)胞系，通常被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。這些細(xì)胞被設(shè)計(jì)成對外源DNA接受性較高，因此在分子克隆、DNA轉(zhuǎn)化和質(zhì)粒擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)中被廣泛使用。DH5α感受態(tài)細(xì)胞對于吸收外源DNA特別有效，這使得它們在基因工程和分子生物學(xué)研究中成為常見的實(shí)驗(yàn)室工具。二、操作步驟1、前夜接種受體菌（DH5a或DH10B），挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)過夜（約16小時）；2、取1ml過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于100mlLB培養(yǎng)基中，...

BCA法實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟

2024-09-25 一、實(shí)驗(yàn)原理BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法，測定蛋白質(zhì)即在堿性條件下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合，并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反應(yīng)，使其由原來的蘋果綠形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm有強(qiáng)烈的光吸收，且吸光值和蛋白質(zhì)濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此可用于蛋白質(zhì)濃度測定。?二、操作步驟準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品和樣品?：將標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（如牛血清白蛋白BSA）稀釋成一系列已知濃度的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時，將待測樣品適當(dāng)稀釋，確保其在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)...

植物組織蛋白質(zhì)提取方法

2024-09-25 方法一：1.根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。2.樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時）。3.用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4.提取上清夜，樣品制備完成。5.蛋白質(zhì)提取液：300ml1Mtris-HCl（PH8）45ml甘油（Glycerol）75ml聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g這種方法針對SDS-PAGE，垂...