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細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法
2024-07-10
細(xì)胞凋亡的過(guò)程在不同點(diǎn)受到嚴(yán)格調(diào)控，因此可以評(píng)估所涉及的不同蛋白質(zhì)的活性。由于細(xì)胞凋亡和壞死的過(guò)程可能重疊，因此必須通過(guò)兩種不同的測(cè)定來(lái)確認(rèn)細(xì)胞死亡的機(jī)制。下面讓我們一起來(lái)看看細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法吧！1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化用光學(xué)顯微鏡觀察蘇木精和伊紅染色的組織切片可以觀察到凋亡細(xì)胞。該方法檢測(cè)的是處于凋亡后期的細(xì)胞，但不能識(shí)別處于凋亡早期的細(xì)胞。透射電子顯微鏡(TEM)是確認(rèn)細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)。2.DNADNAladdering技術(shù)是另一種檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法，它使細(xì)胞凋亡過(guò)程中核酸內(nèi)...
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細(xì)胞凋亡的機(jī)制是什么？
2024-07-10
細(xì)胞凋亡是一種正常的基因程序性細(xì)胞死亡，其中衰老細(xì)胞在其生命周期結(jié)束時(shí)收縮，其剩余片段被吞噬而沒(méi)有任何炎癥反應(yīng)。細(xì)胞凋亡的過(guò)程非常復(fù)雜和復(fù)雜，涉及一系列依賴(lài)能量的分子事件。那么你知道細(xì)胞凋亡的機(jī)制是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！1.外在或死亡受體通路啟動(dòng)細(xì)胞凋亡的外在途徑涉及跨膜受體介導(dǎo)的相互作用。這些相互作用發(fā)生在配體及其相應(yīng)的死亡受體之間，這些受體都是腫瘤壞死因子(TNF)家族的一部分。TNF受體家族的所有成員共享一個(gè)共同的富含半胱氨酸的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域含有約80個(gè)氨...
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什么是細(xì)胞凋亡
2024-07-10
細(xì)胞凋亡是一種正常的基因程序性細(xì)胞死亡，其中衰老細(xì)胞在其生命周期結(jié)束時(shí)收縮，其剩余片段被吞噬而沒(méi)有任何炎癥反應(yīng)。下面讓我們一起來(lái)看看什么是細(xì)胞凋亡吧！1972年，Kerr、Wyllie和Currie在一篇論文中引入了細(xì)胞凋亡一詞，以描述形態(tài)上不同的細(xì)胞死亡類(lèi)型。它由一系列導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)變化或死亡的生化變化組成。它導(dǎo)致平均成年人每天有50至700億個(gè)細(xì)胞死亡。因?yàn)榧?xì)胞會(huì)經(jīng)歷一個(gè)高度調(diào)節(jié)的過(guò)程，以按程序從體內(nèi)清除細(xì)胞。大多數(shù)細(xì)胞都具有作為細(xì)胞周期一部分的細(xì)胞凋亡的內(nèi)在機(jī)制。這種機(jī)制...
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PCR和凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果常見(jiàn)的問(wèn)題及原因分析
2024-07-10
為了排除某些因素對(duì)PCR結(jié)果的影響，PCR實(shí)驗(yàn)需要對(duì)照實(shí)驗(yàn)。PCR的陽(yáng)性對(duì)照是Marker，推測(cè)PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度，判斷PCR產(chǎn)物是否是目的片段。PCR的陰性對(duì)照是PCR的空白管，除了模板不加之外，其成分與其他管一樣，證明沒(méi)有其他模板污染。下面讓我們一起來(lái)看看PCR和凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果常見(jiàn)的問(wèn)題及原因分析吧！一、耗材選擇不當(dāng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成很大的影響PCR耗材一般都是聚丙烯(PP)材質(zhì)，因其為生物學(xué)惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有著良好的化學(xué)耐性，及溫度耐受性。這些材料通常會(huì)與...
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細(xì)菌活化的方法
2024-06-13
菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復(fù)壯過(guò)程，因?yàn)楸４鏁r(shí)的條件往往和培養(yǎng)時(shí)的條件不相同，所以要活化，讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。下面讓我們一起來(lái)看看細(xì)菌活化的方法吧！一、一般菌種臨時(shí)存放及活化1.低溫保存管應(yīng)存放于-20℃~-80℃之低溫條件下。2.準(zhǔn)備37℃之70﹪酒精浴槽(只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險(xiǎn)；若以37℃水浴取代，應(yīng)避免水中微生物污染...
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染的分類(lèi)
2024-06-13
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源性基因?qū)氲郊?xì)胞內(nèi)的技術(shù)。那你知道細(xì)胞轉(zhuǎn)染是如何分類(lèi)的嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、根據(jù)導(dǎo)入的核酸存在于宿主細(xì)胞的時(shí)間長(zhǎng)短，可分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染(transienttransfection)：指將精心構(gòu)建的質(zhì)粒通過(guò)一定方式導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，其中所攜帶的外源基因不與細(xì)胞內(nèi)基因組整合。細(xì)胞中外源基因的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)時(shí)間有限，通常僅持續(xù)數(shù)日，直至外源基因由于細(xì)胞分裂過(guò)程中的各種因素而喪失。此方法常用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的研究。目前，憑借多種轉(zhuǎn)染試劑的...
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細(xì)胞凍存的操作步驟
2024-06-13
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。既可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，又起到了細(xì)胞保種的作用。那么你知道細(xì)胞凍存的操作步驟是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，要先做好準(zhǔn)備工作：將凍存管、離心管、移液管、移液器等耗材準(zhǔn)備齊全，放入超凈臺(tái)中，打開(kāi)紫外線(xiàn)照射30分鐘。打開(kāi)通風(fēng)機(jī)通風(fēng)3分鐘。用75%酒精擦拭操作臺(tái)和雙手。準(zhǔn)...
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蛋白質(zhì)的純化方法
2024-06-13
蛋白質(zhì)的純化方法蛋白純化是指通過(guò)基因工程技術(shù)將編碼蛋白的核酸序列導(dǎo)入到宿主細(xì)胞，使其大量表達(dá)，再使用適當(dāng)?shù)募兓椒▽⑵湓隗w外純化出來(lái)，從而獲得高純度、活性和產(chǎn)量的蛋白質(zhì)。那么蛋白質(zhì)的純化方法都有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、凝膠層析：根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)，不同蛋白的形態(tài)和分子大小存在差異，在混合物通過(guò)含有填充顆粒的凝膠層析柱時(shí)，由于各種蛋白的分子大小不同，擴(kuò)散進(jìn)入特定大小孔徑顆粒內(nèi)的能力也不同，大的蛋白分子會(huì)被先洗脫出來(lái)，分子越小越晚洗脫。二、離子交換層析：基于...
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