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細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么？
2023-10-20
你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞計(jì)數(shù)將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計(jì)數(shù)；500g離心4min，去上清。二、制備單細(xì)胞懸液將收集的細(xì)胞用1mL0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復(fù)2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個(gè)細(xì)胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細(xì)胞懸液，400g離心5min去上清。三、固定每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞，2-8°孵育20min。四、洗滌400g離心5m...
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免疫細(xì)胞（ICC）實(shí)驗(yàn)步驟有哪些？
2023-10-19
免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)是一種使用熒光抗體或染料來檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)靶抗原的技術(shù)。那么你知道免疫細(xì)胞（ICC）實(shí)驗(yàn)步驟有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞培養(yǎng)/固定很多抗原在離體組織中只存在很短時(shí)間，自溶（autolysis）和壞死（necrosis）使得抗原進(jìn)一步降解，組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)被破壞。樣品浸泡在合適的固定液中，固定液完quan滲透組織，使蛋白失去活性，并且使組織被保存、穩(wěn)定在接近invivo狀態(tài)。二、通透處理通透即為對(duì)細(xì)胞膜進(jìn)行打孔處理，使抗體能進(jìn)入到細(xì)胞中和抗原發(fā)生結(jié)合。通...
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免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題有哪些？
2023-10-19
免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry，IHC)是一種綜合定性、定位和定量；形態(tài)、機(jī)能和代謝密切結(jié)合為一體的研究和檢測(cè)技術(shù)。在原位檢測(cè)出病原的同時(shí)，還能觀察到組織病變與該病原的關(guān)系，確認(rèn)受染細(xì)胞類型，從而有助于了解疾病的發(fā)病機(jī)理和病理過程。那么你知道免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、石蠟切片再染色過程出現(xiàn)脫片現(xiàn)象1.烤片時(shí)間不夠，或溫度不夠，可以延長(zhǎng)烤片時(shí)間和提高烤片溫度；2.用含有多聚賴氨酸的玻片，可以購(gòu)買到或這自己做；3.有些組織本身就...
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二代測(cè)序（NGS）的原理
2023-10-18
DNA測(cè)序技術(shù)一直是分子生物學(xué)相關(guān)研究中常用的技術(shù)手段之一，從一定程度上推動(dòng)了該領(lǐng)域的快速發(fā)展。每一代測(cè)序技術(shù)的更替都標(biāo)志著生物學(xué)中基因芯片、數(shù)據(jù)分析、表面化學(xué)、生物工程等技術(shù)領(lǐng)域有了新的突破，使測(cè)序向著高通量、低成本、高安全性和商業(yè)化的方向發(fā)展。那么二代測(cè)序(NGS)的原理是什么？讓我們一起來看看吧！第二代測(cè)序(NGS)又稱為高通量測(cè)序(High-throughputsequencing)，是基于PCR和基因芯片發(fā)展而來的DNA測(cè)序技術(shù)。二代測(cè)序引入了可逆終止末端，從而實(shí)現(xiàn)...
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支原體污染的檢測(cè)方法有哪些？
2023-10-18
支原體污染一般在顯微鏡下不可見，很難察覺，但細(xì)胞會(huì)受到極大的損傷，主要通過以下途徑影響細(xì)胞生長(zhǎng)及功能。那么支原體污染的檢測(cè)方法有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、分離培養(yǎng)法檢測(cè)方法：將待檢樣品接種到適合支原體生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基中，如有支原體污染，液體培養(yǎng)基顏色會(huì)改變，固體培養(yǎng)基將會(huì)有菌落生長(zhǎng)。優(yōu)點(diǎn)：該方法被稱為支原體培養(yǎng)法的金標(biāo)準(zhǔn)，可以檢測(cè)絕大多數(shù)支原體。缺點(diǎn)：支原體生長(zhǎng)到一定數(shù)量才能判斷是否有污染，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，無法實(shí)現(xiàn)對(duì)支原體的快速檢測(cè)二、原位染色法檢測(cè)方法：通過染...
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細(xì)胞被支原體污染，該怎么辦？
2023-10-18
支原體是目前為止發(fā)現(xiàn)的最小的原核生物，支原體污染一般在顯微鏡下不可見，很難察覺，但細(xì)胞會(huì)受到極大的損傷，主要通過以下途徑影響細(xì)胞生長(zhǎng)及功能。那么細(xì)胞被支原體污染，該怎么辦呢？讓我們一起來看看吧！一、支原體污染的來源1.環(huán)境污染：如細(xì)胞培養(yǎng)房、細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)內(nèi)已被支原體污染；2.實(shí)驗(yàn)器材的污染：移液槍、移液管、細(xì)胞培養(yǎng)皿、水浴鍋等；3.細(xì)胞培養(yǎng)試劑的污染：培養(yǎng)基、胰酶、血清、細(xì)胞凍存液等；二、處理方法1.及時(shí)更換培養(yǎng)液：可以減緩支原體的污染，但不能wan全清除；2.使用...
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夾心法與競(jìng)爭(zhēng)法的ELISA檢測(cè)原理是什么？
2023-10-18
ELISA的原理是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。那么你知道夾心法與競(jìng)爭(zhēng)法的ELISA檢測(cè)原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、夾心法原理夾心法使用的是兩個(gè)抗體夾抗原或者兩個(gè)抗原夾抗體的方法，這種復(fù)合物被稱之為三明治夾心結(jié)構(gòu)，利用一對(duì)配對(duì)wan全的抗體，可以特異性檢測(cè)抗原，當(dāng)然主要針對(duì)的是具有至少2個(gè)以上抗原表位的抗原，抗體的配對(duì)可是門技術(shù)活，很多公...
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直接法與間接法的ELISA檢測(cè)原理是什么？
2023-10-18
在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。那么你知道直接法與間接法的ELISA檢測(cè)原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、直接法原理直接法是利用包被抗原，檢測(cè)抗體或者進(jìn)行重組蛋白的活性驗(yàn)證，利用蛋白與板材（即微孔板底）通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動(dòng)吸附,通過引入其它活性基團(tuán)如氨基和碳基的共價(jià)結(jié)合，以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合等等，當(dāng)然也有利用親和素預(yù)包被的板材，通過...
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