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你知道什么是瓊脂糖凝膠電泳嗎？
2023-10-25
你知道什么是你知道什么是瓊脂糖凝膠電泳嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)核酸分子是兩性解離分子，在高于其等電點(diǎn)的電泳緩沖液中，其堿基不解離，而磷酸基團(tuán)全部解離，核酸分子因而帶負(fù)電荷，電泳時(shí)向正極遷移。瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取而來(lái)并經(jīng)糖基化修飾，為一種聚合鏈線性分子，使用瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質(zhì)，發(fā)揮分子篩功能，使得大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異，從而達(dá)到分離的目的。因此，目前多用瓊脂糖為電泳支持物進(jìn)行平板電泳，其優(yōu)點(diǎn)如下。（1）瓊脂糖凝膠電泳操...
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瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的試驗(yàn)方法是什么？注意事項(xiàng)有什么？
2023-10-25
你知道瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法是什么嗎？有什么注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)方法1.擇適合樣品預(yù)期片段大小的瓊脂糖凝膠濃度百分比。將瓊脂糖粉末與用于運(yùn)行凝膠的相同類(lèi)型的緩沖液（TAE）結(jié)合起來(lái)，加熱使混合物融化，避免沸騰。2.選擇所需尺寸的凝膠澆注模具和梳子，為樣品和marker提供足夠數(shù)量的孔，以及容納每個(gè)待裝樣品數(shù)量的孔容量。3.膠凝固后，將凝膠放入電泳儀中，電泳液沒(méi)過(guò)凝膠，根據(jù)加入量的多少，決定混合多少u(mài)l的lodingbuffer，將樣液混...
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如何選擇DNA提取方法
2023-10-25
DNA的提取可以簡(jiǎn)單的分為裂解和純化兩大步驟，裂解是破壞樣品細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而使樣品中的DNA游離在裂解體系中的過(guò)程，純化則是使DNA與裂解體系中的其它成分，如蛋白質(zhì)、鹽及其它雜質(zhì)分離的過(guò)程。那么該如何選擇DNA提取方法呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、酚氯仿抽提法酚氯仿抽提是去除蛋白質(zhì)的有效手段，但如果蛋白質(zhì)含量超過(guò)了其飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)就不會(huì)被一次性去除，需要進(jìn)行多次反復(fù)抽提，而每次的抽提均會(huì)導(dǎo)致核酸的損失。酚氯仿抽提的優(yōu)勢(shì)是成本低廉，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較低。二、高鹽沉淀法高鹽...
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熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么？
2023-10-24
熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門(mén)新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性原位雜交技術(shù)。那么你知道熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.實(shí)驗(yàn)用具及材料（1）人的MyoD1（MYF3)基因探、人外周血中期染色體細(xì)胞標(biāo)本；（2）指甲油、甲酰胺、氯化鈉、檸檬酸鈉、*、吐溫20等；（3）恒溫水浴鍋、培養(yǎng)箱、染色缸、載玻...
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蛋白表達(dá)的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？
2023-10-24
蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)的時(shí)，有時(shí)候?qū)嶒?yàn)會(huì)覺(jué)得參考實(shí)驗(yàn)方法和克隆的蛋白基因序列wan全沒(méi)有問(wèn)題，但蛋白電泳就是沒(méi)有結(jié)果。下面讓我們一起來(lái)看看蛋白表達(dá)的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些吧！1、載體構(gòu)建錯(cuò)誤，很多克隆新人經(jīng)常弄錯(cuò)讀碼框。比如Qiagen的pQE系列載體，其克隆位點(diǎn)常有一兩個(gè)堿基的區(qū)別；另外有些酶產(chǎn)生粘端有些酶產(chǎn)生平端，這些都容易導(dǎo)致讀碼框錯(cuò)誤，從而表達(dá)不出來(lái)。2、宿主菌選擇不當(dāng)，不同的宿主菌其基因型是不一樣的。有些經(jīng)過(guò)特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動(dòng)子的載體，必須選擇合適的宿...
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PCR反應(yīng)體系主要是什么？
2023-10-23
你知道PCR反應(yīng)體系主要包含那些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、模板（template)模板即擴(kuò)增用的DNA，可以是任何來(lái)源DNA(如基因組DNA、質(zhì)粒DNA等)或RNA（如總RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等），但必須符合兩個(gè)條件：一是純度必須較高，二是濃度不能太高以免抑制。模板是待擴(kuò)增的目的基因或特異片段，如診斷病人是否攜帶有突變基因時(shí)，其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR對(duì)模板DNA的純度不要求很高，但應(yīng)盡量不含有對(duì)PCR反應(yīng)有抑制作用的雜...
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PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么？
2023-10-23
你知道PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、PCR技術(shù)基本原理PCR是一種選擇性體外快速擴(kuò)增DNA片段的方法。在體外以類(lèi)似于細(xì)胞內(nèi)DNA的半保留復(fù)制過(guò)程，以擬擴(kuò)增的模板DNA分子，與模板DNA互補(bǔ)的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應(yīng)體系，經(jīng)過(guò)重復(fù)地變性一退火一延伸三步，擴(kuò)增新的目的DNA鏈，這個(gè)過(guò)程通過(guò)控制反應(yīng)體系的溫度來(lái)實(shí)現(xiàn)。PCR包含下列三步反應(yīng)：1、變性(denaturation)將反應(yīng)體系混合物經(jīng)加熱至94...
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如何選擇免疫組化中的一抗？
2023-10-20
免疫組化實(shí)驗(yàn)看似容易，但真想把結(jié)果做漂亮，還是需要花上很長(zhǎng)一段時(shí)間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。一味按照網(wǎng)上操作流程來(lái)做，結(jié)果往往并不理想，最終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。那么如何選擇免疫組化實(shí)驗(yàn)中的一抗呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、單克隆和多克隆抗體的選擇存在于抗原表面的，決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)稱(chēng)為抗原決定簇，又稱(chēng)抗原表位。一個(gè)抗原可以有一種或多種不同的抗原表位，每種表位只有一種抗原特異性。用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的抗體，就是...
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