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細胞轉(zhuǎn)染過程中需要注意什么？
2023-09-28
隨著基因和蛋白功能的深入研究，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為科研實驗中最chang用的技術(shù)手段之一。那么在細胞轉(zhuǎn)染過程中需要注意什么呢？讓我們一起來看看吧！一、轉(zhuǎn)染試劑不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉(zhuǎn)染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇最shi合實驗設(shè)計的轉(zhuǎn)染試劑。不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法，但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時應跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實...
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細胞轉(zhuǎn)染是如何分類的？
2023-09-28
細胞轉(zhuǎn)染是指將外源性基因?qū)氲郊毎麅?nèi)的技術(shù)。那你知道細胞轉(zhuǎn)染是如何分類的嗎？讓我們一起來看看吧！一、根據(jù)導入時間長短進行分類根據(jù)導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短，可以分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時轉(zhuǎn)染（transienttransfection）：指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導入到哺乳動物細胞內(nèi)，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細胞自身的基因組上。細胞中瞬時轉(zhuǎn)染的外源基因表達時間有限，通常僅持續(xù)幾天，直到外源基因在細胞分裂過程中因各種因素丟失為止。多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析。...
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PCR管是進行PCR反應實驗的重要器材
2023-09-25
PCR管是PCR反應的重要實驗器材，關(guān)乎反應體系的整體功效。它主要有以下幾個特點：1.需要具備高熱穩(wěn)定性。PCR反應過程中，3步中的第一步變性需要高溫，傳統(tǒng)PCR管都是由堅硬的塑料材料制成，能夠承受高溫的影響，不會變形或燒融?，F(xiàn)在還有一種新型PCR管，叫做光學透明PCR管，也具備了一定的熱穩(wěn)定性。2.內(nèi)表面需要具備良好的附著性。這是因為PCR反應的三個步驟需要發(fā)生在管內(nèi)，每個步驟對于成功的PCR反應都是至關(guān)重要的。PCR管內(nèi)表面需要特殊處理，表面要光滑而均勻，以保持雜質(zhì)相對較...
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如何優(yōu)化細胞培養(yǎng)基？
2023-09-20
培養(yǎng)基選擇與優(yōu)化是細胞培養(yǎng)的重要步驟之一，它直接影響到細胞的生長、增殖和功能表達。那么我們該如何選擇與優(yōu)化細胞培養(yǎng)基呢？讓我們一起來看看吧！一、培養(yǎng)基選擇：1.細胞類型：根據(jù)細胞的來源和種類選擇合適的培養(yǎng)基。不同類型的細胞有著不同的營養(yǎng)需求和生長特性，因此需要選擇能夠滿足其需求的培養(yǎng)基。常見的培養(yǎng)基有DMEM、RPMI1640、MEM等。2.營養(yǎng)需求：細胞通過培養(yǎng)基中的成分來獲取所需的營養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)細胞的需求，可以調(diào)整培養(yǎng)基的氨基酸、脂類、無機鹽等成分的配比和濃度。3.補充物...
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細胞擴增技術(shù)與策略有什么?
2023-09-20
細胞擴增技術(shù)與策略是實現(xiàn)細胞大規(guī)模增殖的關(guān)鍵步驟，可以根據(jù)細胞類型、擴增需求和實際情況選擇不同的技術(shù)和策略。那么你知道細胞擴增技術(shù)與策略有什么嗎?讓我們一起來看看吧！一、傳代培養(yǎng)：1.間歇性傳代：將細胞從培養(yǎng)器具（如細胞瓶或培養(yǎng)皿）中解離并移植到新的培養(yǎng)器具中，以分離細胞，控制細胞密度和細胞增殖速率。2.連續(xù)傳代：利用旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)器具（如旋轉(zhuǎn)壺、旋轉(zhuǎn)筒）或生物反應器等，實現(xiàn)細胞的持續(xù)增殖。連續(xù)傳代可以減少人工處理和移植對細胞的傷害，提高細胞擴增效率。二、懸浮培養(yǎng)：1.攪拌培養(yǎng)：...
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PCR管的維護保養(yǎng)方法
2023-09-19
聚合酶鏈式反應(PCR)是基因工程中常用的一種分子生物學技術(shù)，PCR管通過模擬體內(nèi)DNA復制過程快速合成特定DNA片段。其原理基于DNA的復制過程，包括三個步驟：變性、退火和延伸。變性(Denaturation)階段，反應體系中的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)在高溫(通常為94°C-98°C)下被分離成兩條單鏈DNA。這一步是通過加熱使兩條DNA鏈斷裂，目的是將DNA的雙鏈結(jié)構(gòu)變?yōu)閱捂溄Y(jié)構(gòu)以提供模板。退火(Annealing)階段，溫度被降低至50°C-65°C，此時引物(Primers)能...
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如何正確保存抗體？
2023-09-18
抗體保存的是否得當，直接決定了抗體的活性和使用效果，那么我們該如何正確保存抗體呢？讓我們一起來看看吧！一、保存溫度和條件很多抗體的最佳保存條件是分裝成小包裝凍存于-20°C或-80°C。分裝能使凍融引起的損失減到最小，同時可避免多次在一個管內(nèi)取樣而由槍頭引入的污染。分裝凍存的抗體，融解一次后剩余抗體應保存于4°C。收到抗體后，應10,000xg離心20秒，使管口螺紋內(nèi)的抗體溶液全部離心至管底，用低蛋白吸附性的微量離心管分裝。分裝量的多少取決于每次試驗的使用量。分裝量不能少于1...
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qPCR實驗的Ct值有什么作用？
2023-09-18
qPCR擴增過程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達到設(shè)定的熒光閾值時的所對應的擴增循環(huán)數(shù)（CycleThreshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。簡單講，Ct值就是qPCR中起始模板擴增達到一定產(chǎn)物量時，所對應的循環(huán)數(shù)。那么你知道qPCR實驗中的Ct值有什么作用嗎？讓我們一起來看看吧！一、指數(shù)擴增、模板量與Ct值的關(guān)系理想情況下，qPCR中的基因經(jīng)過一定的循環(huán)數(shù)被指數(shù)擴增而積累，擴增循環(huán)數(shù)和產(chǎn)物量之間的關(guān)系是：擴增產(chǎn)物量=起始模板量×（1+En）循環(huán)個數(shù)。然而qPC...
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