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如何對(duì)pcr結(jié)果進(jìn)行分析?
2024-11-12
一、PCR結(jié)果分析的基本步驟：?1.基線設(shè)置?：實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)的基線是指在PCR的初始循環(huán)期間的信號(hào)水平，通常是3至15個(gè)循環(huán)之間，此時(shí)熒光信號(hào)幾乎沒(méi)有變化，可以認(rèn)為是背景或反應(yīng)的噪音。2.?閾值設(shè)定?：?qPCR的閾值代表的是明顯超出基線的擴(kuò)增信號(hào)水平，用以區(qū)分明確的擴(kuò)增信號(hào)和背景。通常qPCR儀器自帶軟件會(huì)自動(dòng)將閾值設(shè)置為基線熒光值標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。3.?CT值計(jì)算?：Ct是指熒光信號(hào)超過(guò)閾值時(shí)對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)，Ct值與目的基因的起始量成反比，可用于計(jì)算DNA初始拷貝數(shù)。4....
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DMEM培養(yǎng)基變色原因
2024-11-12
DMEM(Dulbecco'sModifiedEagleMedium)培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)。一般情況下DMEM培養(yǎng)基呈鮮紅色，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)、培養(yǎng)條件以及培養(yǎng)基成分發(fā)生變化，培養(yǎng)基的顏色也會(huì)發(fā)生變化。以下是DMEM培養(yǎng)基變色的常見(jiàn)原因：1.pH值變化DMEM培養(yǎng)基中含有酚紅，它是一種pH指示劑，能夠根據(jù)培養(yǎng)基的pH值變化而改變顏色。在pH值低于6.8時(shí)培養(yǎng)基呈黃色，pH在7.4時(shí)為紅色，pH高于8.2時(shí)則呈紫色。2.細(xì)胞代謝活動(dòng)細(xì)胞在代謝過(guò)程中，會(huì)消耗培養(yǎng)基中的糖分并產(chǎn)生乳酸...
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細(xì)胞漂浮也有可能是你操作不當(dāng)！
2024-11-11
細(xì)胞如若在生長(zhǎng)過(guò)程中遇到漂浮困境，你有沒(méi)有想過(guò)會(huì)是操作不當(dāng)？！接下來(lái)，跟隨康康一起，探討這個(gè)非微生物原因?qū)е碌募?xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題，并找到讓它正常發(fā)展的解決方案。復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因一：細(xì)胞本身貼壁能力較弱比如細(xì)胞轉(zhuǎn)染的明星細(xì)胞293T，它生長(zhǎng)較快，但貼壁能力弱，容易出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象。293細(xì)胞∝解決辦法：提前使用明膠包被板子，增強(qiáng)吸附性。另外，還建議使用TC處理（tissueculturetreated）的培養(yǎng)瓶/皿促進(jìn)細(xì)胞貼壁附著。復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因二：培養(yǎng)基選擇錯(cuò)誤比如29...
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簡(jiǎn)石生物瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒TD407操作步驟
2024-11-08
簡(jiǎn)石瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒TD407代理——天津益元利康生物科技有限公司。一、產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：1.從瓊脂糖凝膠中快速（15分鐘）高產(chǎn)量地回收超純的DNA；2.特制的微量柱設(shè)計(jì)使得DNA可以在高濃度下洗脫到最小體積（≥10µl）；3.洗脫的DNA非常適合用于DNA連接、測(cè)序、標(biāo)記、PCR等應(yīng)用。二、操作使用：（以下離心操作步驟的離心力均在10,000-16,000xg之間進(jìn)行）簡(jiǎn)石DNA回收試劑盒操作步驟一：使用刀片或手術(shù)刀把DNA片段從瓊脂糖凝膠上切除下來(lái)并且移置到...
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六孔板總是鋪不均勻怎么辦呢？
2024-11-08
細(xì)胞鋪板不均會(huì)影響后續(xù)的干預(yù)效果和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)一致性和可信度。而細(xì)胞鋪板不均勻又是大部分小伙伴們都會(huì)遇到的問(wèn)題，那這個(gè)問(wèn)題該怎么解決呢？下面就結(jié)合相關(guān)資料以及個(gè)人經(jīng)驗(yàn)跟大家簡(jiǎn)單分享一下孔板鋪板不均勻的可能原因以及可供參考的解決方法。六孔板鋪不均勻原因一：板子選擇問(wèn)題板材質(zhì)量不佳，導(dǎo)致鋪板不均勻。一些廉價(jià)的孔板可能存在制造本身上的不均勻，從而導(dǎo)致細(xì)胞分布不均。這是因?yàn)榧?xì)胞傾向于在板孔內(nèi)部的某些特定區(qū)域黏附，這些區(qū)域通常存在細(xì)微的結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)的不一致。解決方法：更換表面平整度高的高...
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Alzet滲透泵工作原理及優(yōu)點(diǎn)
2024-11-07
一、Alzet滲透泵工作原理：滲透壓泵可被埋植在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的皮下或者腹腔，滲透層與泵體埋植組織之間高滲透壓導(dǎo)致組織內(nèi)水分通過(guò)泵體外層的剛性半透膜進(jìn)入滲透層，從而擠壓由柔韌的非滲透性膜組成的藥池，使藥池內(nèi)的試劑以預(yù)定的速度釋放。滲透壓泵屬于控釋釋放型給藥系統(tǒng)，利用滲透壓原理制成，可以實(shí)現(xiàn)藥物的恒速釋放，受生理因素的影響較小，是目前應(yīng)用最多的控釋制劑。二、Alzet滲透泵優(yōu)點(diǎn)：1.安全：無(wú)菌包裝、醫(yī)療級(jí)、創(chuàng)傷小、無(wú)異物排斥反應(yīng)、可植入式2.多樣：動(dòng)物：如小鼠、大鼠等，已驗(yàn)證29種動(dòng)...
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單雙端測(cè)序有什么不同？
2024-11-06
單端測(cè)序和雙端測(cè)序的主要區(qū)別在于測(cè)序方式、應(yīng)用場(chǎng)景和測(cè)序質(zhì)量上。?一、?單端測(cè)序和雙端測(cè)序的主要區(qū)別一：測(cè)序方式1.?單端測(cè)序（Single-Read）?：?jiǎn)味藴y(cè)序是從DNA片段的一端進(jìn)行測(cè)序，只讀取一個(gè)方向的序列信息。在測(cè)序過(guò)程中，DNA樣本被片段化處理成200-500bp的片段，引物序列連接到DNA片段的一端，然后進(jìn)行測(cè)序?。2.?雙端測(cè)序（Paired-End）?：雙端測(cè)序同時(shí)從DNA片段的兩端進(jìn)行測(cè)序，讀取兩個(gè)方向的序列信息。在構(gòu)建文庫(kù)時(shí)，兩端都加上測(cè)序引物結(jié)合位點(diǎn)，...
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一文了解mNGS
2024-11-05
繼上文《一文了解tNGS》之后，今天我們講講它的“兄弟”——mNGS吧~一、?mNGS簡(jiǎn)介?mNGS（MetagenomicNextGenerationSequencing）?是一種無(wú)需培養(yǎng)即可快速鑒定感染病原體的新技術(shù)，即宏基因組學(xué)二代測(cè)序技術(shù)，正在改變病原微生物檢測(cè)的現(xiàn)狀。它通過(guò)無(wú)需培養(yǎng)樣本的方式，實(shí)現(xiàn)高通量、快速鑒定感染病原體，顯著提高了檢測(cè)的敏感性和特異性。其原理、優(yōu)點(diǎn)和應(yīng)用場(chǎng)景如下。二、?mNGS原理mNGS通過(guò)對(duì)臨床樣本的DNA或RNA進(jìn)行高通量測(cè)序，無(wú)差別、無(wú)選...
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