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細胞凋亡的檢測

2024-11-19 一、光學顯微鏡觀察凋亡細胞的主要特征為核染色質(zhì)致密深染，形成致密質(zhì)塊，有時可碎裂。檢測方法：細胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細胞的形態(tài)改變，結合顯微測量工具可作凋亡細胞計數(shù)。二、視頻時差顯微技術細胞培養(yǎng)中常用，通過相差顯微鏡可動態(tài)觀察細胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細胞表和外形的變化。檢測方法：收集2×10^5細胞/ml培養(yǎng)的細胞，置于多孔培養(yǎng)板，加入凋亡誘導劑，在帶有自動攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細胞的動態(tài)改變，每隔1分鐘作序列攝影...

PCR擴增反應中的嵌合體是什么？

2024-11-18 PCR實驗中產(chǎn)生的嵌合體你知道是什么呢？它怎么產(chǎn)生的呢？那又如何預防和處理呢？這篇文章讓我們一起了解一下吧！一、PCR嵌合體是什么PCR嵌合體(ChimericProducts)：PCR擴增反應中的嵌合體是指一個PCR產(chǎn)物來自兩個或多個模板分子，通常是由于延伸未完quan導致的?。這種現(xiàn)象通常發(fā)生在PCR反應中，特別是當使用多重PCR或復雜模板時。嵌合體會導致擴增產(chǎn)物中含有非預期的片段，有可能會影響實驗結果的準確性，甚至導致錯誤的解釋。二、形成原理在PCR反應中，DNA模板在...

流式細胞儀怎么分選T細胞?

2024-11-18 上文介紹了流式細胞術的原理及應用，今天讓我們學習一下怎么用流式細胞儀分選T細胞吧~一、樣本制備1.取樣:取100μL抗凝血。2.標記：根據(jù)抗體說明書標記實驗管。混勻后，室溫避光孵育15分鐘。3.溶血：將10×裂紅液用水稀釋10倍，每管加入1mL，振蕩器混勻后室溫避光靜置10分鐘，300g，4°C離心5分鐘。4.洗滌：棄去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g離心洗滌5分鐘，洗2-3次。5.上機檢測：棄去上清后加入500μL1×PBS，混勻懸浮后過濾，避光等待上機檢測。二、儀...

流式細胞術原理及應用

2024-11-15 流式細胞儀在手，卻不知道原理？快來看看這篇文章吧！一、流式細胞術實驗原理流式細胞術（FlowCytometry,FCM）是一種單細胞定量分析技術，該技術通過測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收等參數(shù)，可以定量分析細胞的結構特征（如DNA含量、蛋白、細胞膜、胞漿或胞核抗原表達量）和功能特征（如細胞內(nèi)酶活性、鈣流變化等）等多種重要參數(shù)，進行細胞特征分析與分選。它的核心功能是將混合物中的不同細胞分離并計數(shù)，將感興趣的細胞分選出來，提供分類比例并進行進一步分析。二、流式細胞技術應用1...

引物探針的使用方法有哪些？

2024-11-14 一、引物探針的使用步驟?引物探針使用步驟一：?設計引物和探針?：首先需要根據(jù)目標DNA序列設計特異性引物和探針。引物的長度一般為20-25個核苷酸，探針的長度一般為15-25個核苷酸。設計時要注意避免非特異性擴增，確保引物的特異性和探針的Tm值比引物Tm值高8-10°C?。引物探針使用步驟二：?提取模板DNA?：從待測樣本中提取DNA，作為PCR反應的模板。確保模板DNA的質(zhì)量和濃度，以獲得可靠的實驗結果?。引物探針使用步驟三：?配制PCR反應體系?：根據(jù)實驗需求，配制含有引...

IHC出現(xiàn)假陽性、假陰性等問題該怎么辦?

2024-11-13 ?免疫組化（IHC）實驗中出現(xiàn)假陽性和假陰性了怎么辦呢？一、假陽性的處理1.?降低一抗?jié)舛?：通過降低一抗的濃度，可以減少非特異性結合，從而降低假陽性。通常，降低濃度至能看到陽性表達且能明顯區(qū)分陽性區(qū)域與周圍間質(zhì)即可?。2.?調(diào)整封閉條件?：逐步提高封閉條件，從山羊血清到5%BSA+山羊血清，最終至5%脫脂奶。通常調(diào)整至5%BSA+山羊血清即可，不建議輕易使用5%脫脂奶?。3.?選擇合適的二抗?：對于動物標本，選擇抗鼠或抗兔的二抗，避免使用通用型二抗，以免種屬間抗原抗體反應引...

離心柱法提取DNA步驟

2024-11-13 常見核酸提取純化方法苯酚氯仿抽提法、磁珠法核酸分離技術、離心柱純化法等，今天我們來看下離心柱法的實驗步驟和優(yōu)缺點吧~一、離心柱法提取DNA步驟離心柱法提取DNA步驟一將組織或細胞懸液加入裂解緩沖液，渦旋混勻。裂解緩沖液中含有變性劑（如胍異硫氰酸鹽），可以有效地裂解細胞和組織，破壞細胞膜和細胞核膜，同時使核酸與蛋白質(zhì)分離。離心柱法提取DNA步驟二將裂解液轉移到DNASpinColumn中，離心收集流穿液。這個步驟涉及到將裂解液通過一個特殊的膜過濾，該膜具有特定的孔徑，允許小分子...

Alzet滲透泵濃度你會計算嗎？

2024-11-12 藥物濃度的調(diào)配需根據(jù)每日用藥量和緩釋泵的輸送速率兩項參數(shù)來計算，每日用藥量可通過查閱專業(yè)文獻獲取。此外，每支緩釋泵的輸送速率信息會附在包裝盒上，應根據(jù)包裝上的速率進行配藥。濃度計算舉例：2001滲透泵，給藥：抗利尿激素(ADH)，1.查閱文獻發(fā)現(xiàn)，大鼠正常的ADH分泌量為30ng/天/只，或1.25ng/小時/只。然后，計算出完成1.25ng/小時所需輸注量所需的ADH濃度：ko=Q?Cd其中ko(µg/hr)是質(zhì)量輸送速率，Cd(µg/µ...