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質(zhì)粒構(gòu)建的過程有哪些？
2024-01-04
質(zhì)粒構(gòu)建是分子生物學(xué)研究中zui常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，原理依賴于限制性核酸內(nèi)切酶，DNA連接酶和其他修飾酶的作用，分別對(duì)目的基因和載體DNA進(jìn)行適當(dāng)切割和修飾后，將二者連接在一起，再導(dǎo)入宿主細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)目的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)的正確表達(dá)。那么你知道質(zhì)粒構(gòu)建的過程有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、質(zhì)粒載體制備質(zhì)粒載體的制備既可以選擇單酶切也可以選擇雙酶切，一般推薦使用雙酶切。其實(shí)目的就只有一個(gè)，盡量使載體的末端具有特異性，防止自連。1）選擇質(zhì)粒上兩個(gè)酶切位點(diǎn)的距離不應(yīng)小于太?。?0bp），...
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質(zhì)粒構(gòu)建的方法有哪些？
2024-01-04
細(xì)菌質(zhì)粒是DNA重組技術(shù)中常用的載體。通過基因工程手段將需要的外源基因送進(jìn)受體細(xì)胞中去進(jìn)行增殖和表達(dá)。將某種目標(biāo)基因片段重組到質(zhì)粒中，構(gòu)成重組基因或重組體。然后將這種重組體經(jīng)微生物學(xué)的轉(zhuǎn)化技術(shù)，轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞(如大腸桿菌)中，使重組體中的目標(biāo)基因在受體菌中得以繁殖或表達(dá)，從而改變寄主細(xì)胞原有的性狀或產(chǎn)生新的物質(zhì)。那么你知道質(zhì)粒構(gòu)建的方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、酶切連接傳統(tǒng)意義上，質(zhì)粒重組是基于堿基互補(bǔ)配對(duì)的原理，一般做法為：1）通過引物在目的片段兩端引入酶切位點(diǎn)；2）...
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細(xì)胞因子有哪幾類？
2024-01-03
細(xì)胞因子（cytokine）是由免疫細(xì)胞及組織細(xì)胞分泌的在細(xì)胞間發(fā)揮相互調(diào)控作用的一類小分子可溶性多肽蛋白，通過結(jié)合相應(yīng)受體調(diào)節(jié)細(xì)胞生長分化和效應(yīng)，調(diào)控免疫應(yīng)答。在一定條件下也參與炎癥等多種疾病的發(fā)生。那么你知道細(xì)胞因子有哪幾類嗎？讓我們一起來看看吧！細(xì)胞因子種類繁多，已發(fā)現(xiàn)200余種人細(xì)胞因子，根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能可分為六大類。一、白細(xì)胞介素早期發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子是由白細(xì)胞產(chǎn)生又在白細(xì)胞間發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，故命名為白細(xì)胞介素（IL）。按照其發(fā)現(xiàn)順序給予其IL序號(hào)（如IL-1、IL-2等）并...
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細(xì)胞因子的特點(diǎn)有什么？
2024-01-03
細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞（如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等）和某些非免疫細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等）經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長、APSC多能細(xì)胞以及損傷組織修復(fù)等多種功能。那么你知道細(xì)胞因子的特點(diǎn)有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、多效性一種細(xì)胞因子可以對(duì)不同的細(xì)胞發(fā)揮不同的作用，例如IL-4可以活化B細(xì)胞并促進(jìn)B細(xì)胞的增殖和分化，也可以刺激胸腺細(xì)胞和肥大細(xì)胞增殖。二、重疊性兩...
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如何使用PVDF膜？
2024-01-02
了解或者做過WesternBlot的同學(xué)都應(yīng)該清楚，經(jīng)過電泳分離后的蛋白質(zhì)樣品需經(jīng)過“轉(zhuǎn)膜”步驟，將蛋白從PAGE膠轉(zhuǎn)移到膜上進(jìn)行固定后，才能進(jìn)行后續(xù)各種方法的WesternBlot的檢測。WesternBlot中膜的選擇是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)中一般可以選擇硝酸纖維素膜(NC)和PVDF膜，PVDF膜結(jié)合能力強(qiáng)且具有較強(qiáng)的機(jī)械強(qiáng)度，可以重復(fù)使用。那么你知道該如何使用PVDF膜嗎？讓我們一起來看看吧！一、何為PVDF膜？如何選擇PVDF膜?PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（poly...
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WB、IP、IHC、IF、ChIP、FC六種抗體的區(qū)別是什么？
2024-01-02
查詢抗體的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)在抗體應(yīng)用欄中，有的抗體適用于WB、IP、IHC、IF、F、CHIP，而有的抗體適用于WB、IHC、IF、F，不適用于IP和CHIP。那么你知道WB、IP、IHC、IF、ChIP、FC六種抗體的區(qū)別是什么？讓我們一起來看看吧！一、WB蛋白質(zhì)印跡是生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中一項(xiàng)常見的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，原理為利用電泳（SDS-PAGE）分離蛋白質(zhì)，接著將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測的方法，通過分析條帶大小和顯色信號(hào)獲得目標(biāo)蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織樣本表達(dá)情況...
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細(xì)胞培養(yǎng)之胎牛血清的作用跟功效
2023-12-29
細(xì)胞培養(yǎng)是一種重要的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，它可以使人們更好地了解細(xì)胞的生理特性和病理變化。胎牛血清是從胎牛胎兒臍靜脈或心臟采集血液，經(jīng)過一系列加工處理后得到的一種生物學(xué)制品。胎牛血清的生產(chǎn)流程包括采集血液、分離血清、放置、過濾、瓶裝和滅菌等步驟，其成分要求包括高蛋白質(zhì)含量、低內(nèi)毒素、無病原微生物和無抗生素殘留等。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，胎牛血清被廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)基中。那么你知道胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用與功效嗎？讓我們一起來看看吧！胎牛血清作為一種天然的生長因子，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和...
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PCR到底是什么？
2023-12-29
PCR技術(shù)問世已有30多年，期間創(chuàng)新性生物技術(shù)不斷涌現(xiàn)，然而PCR技術(shù)的地位依然不可撼動(dòng)，PCR的全稱是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction），簡單說來，PCR技術(shù)是利用DNA雙鏈復(fù)制的原理，在生物體外大量擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)，PCR作為一項(xiàng)bi不可少的技術(shù)手段，仍被廣泛應(yīng)用在基因克隆、基因表達(dá)分析、病原體檢測、疾病診斷、基因測序、生物制藥、基因/細(xì)胞治療、分子育種、物種鑒定、法醫(yī)鑒定等各個(gè)領(lǐng)域。標(biāo)準(zhǔn)的PCR過程包括三個(gè)步驟：變性(Denatur...
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