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蛋白質(zhì)純化的原理是什么？
2023-11-30
蛋白純化是指通過基因工程技術(shù)將編碼蛋白的核酸序列導(dǎo)入到宿主細(xì)胞，使其大量表達(dá)，再使用適當(dāng)?shù)募兓椒▽⑵湓隗w外純化出來，從而獲得高純度、活性和產(chǎn)量的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)可以分為原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)兩大類。那么你知道蛋白質(zhì)純化的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、乳糖操縱子的負(fù)調(diào)控在沒有乳糖存在時(shí)，lac操縱子處于阻遏狀態(tài)，此時(shí)，I序列表達(dá)Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)。當(dāng)有乳糖存在時(shí)，乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)楫?..
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瓊脂糖凝膠電泳的常見問題有哪些？
2023-11-29
瓊脂糖凝膠電泳是根據(jù)核酸（DNA或RNA）分子大小來分離和識(shí)別物質(zhì)的技術(shù)。那么你知道瓊脂糖凝膠電泳的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、同樣大小的DNA一起跑電泳條帶不一樣大DNA條帶不一樣大，本質(zhì)上是DNA在凝膠中的遷移率不一樣，有的跑得快，有的慢，通常情況同樣大小的DNA，遷移率是一樣的，條帶位置也會(huì)一樣。但遷移率也受很多因素影響，例如DNA的構(gòu)象。例如環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)的DNA，和同等大小的線性DNA（例如單位點(diǎn)酶切后的質(zhì)粒），前者的遷移率要高，表現(xiàn)出來就是看上去超螺...
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細(xì)胞計(jì)數(shù)通用步驟有什么？有何注意事項(xiàng)？
2023-11-29
細(xì)胞計(jì)數(shù)是指對(duì)細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行定量測定的方法。在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定細(xì)胞培養(yǎng)的密度和數(shù)量，可以掌握細(xì)胞生長的情況。同時(shí)，細(xì)胞計(jì)數(shù)也是衡量不同實(shí)驗(yàn)條件下細(xì)胞生長情況的重要指標(biāo)之一。那么你知道細(xì)胞計(jì)數(shù)通用步驟有什么嗎？有何注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞計(jì)數(shù)的通用方法1.以貼壁生長的細(xì)胞為例，消化后的細(xì)胞充分重懸吹散，取一部分轉(zhuǎn)移至干凈的EP管內(nèi)，例如1mL;2.使用酒精棉球輕輕擦拭計(jì)數(shù)板表面和蓋玻片，把后者的邊緣微微濕潤，然后小心蓋在計(jì)數(shù)板的正中間，邊緣要能覆...
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你知道什么是緩沖溶液嗎？
2023-11-28
你知道什么是緩沖溶液嗎？讓我們一起來看看吧！緩沖溶液是許多生化反應(yīng)、生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)過程中的重要溶液，對(duì)穩(wěn)定溶液的酸堿度有重要的影響。最常見的幾種緩沖體系有磷酸鹽緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液、三羥甲基氨基甲烷（簡稱Tris）-HCl緩沖溶液、羥yi基哌qin乙磺酸（供注射用）（簡稱HEPES）緩沖溶液。對(duì)于絕大多數(shù)生物制劑（如疫苗、抗體、ADC偶聯(lián)藥物、脂質(zhì)體等）而言，實(shí)驗(yàn)操作、實(shí)際生產(chǎn)以及生物體內(nèi)的生化反應(yīng)等都需要在特定的pH值范圍內(nèi)才能正常有效地進(jìn)行，從而得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)論或發(fā)揮最...
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如何選擇緩沖溶液？
2023-11-28
三羥甲基氨基甲烷（Tris）是一種應(yīng)用非常廣泛的有機(jī)試劑。它及其衍生物被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖液的制備，可用于制作藥物、有機(jī)合成、生物緩沖劑等。其中在生化實(shí)驗(yàn)中，許多蛋白質(zhì)及核酸相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都需要用Tris作為生物緩沖劑。那么你知道該如何選擇緩沖溶液嗎？讓我們一起來看看吧！TBS即Tris緩沖鹽水，是Tris-HCl緩沖鹽溶液，為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液。因?yàn)門ris堿的堿性較強(qiáng)，所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩...
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細(xì)胞消化的方法有哪些？
2023-11-27
細(xì)胞消化的方法有哪些？我們的細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)大部分會(huì)以貼壁的形式生長，它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)時(shí)，也是與其他細(xì)胞或者細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合的。細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用的wan全培養(yǎng)基中的血清，含有許多帶陽性電荷的促細(xì)胞附著因子(層黏連蛋白Laminine、纖維連接蛋白Fibronectin等胞外基質(zhì)），能幫助細(xì)胞附著于帶陰性電荷的底物上，并形成連接、貼壁伸展。使細(xì)胞解除這種附著，就是細(xì)胞消化。那么你知道細(xì)胞消化的方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、機(jī)械消化法直接用培養(yǎng)基吹打或使用細(xì)胞刮刀，通過外力使細(xì)胞...
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ELISA檢測時(shí)樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備步驟有什么？
2023-11-27
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。那么你知道ELISA檢測時(shí)樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備步驟都有什么嗎？讓我們一起來看看吧！1.血清室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。2.血漿應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。3.尿液用無菌管收集。離心20分鐘左...
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阻斷ELISA與液相阻斷ELISA有什么區(qū)別？
2023-11-27
你知道阻斷ELISA與液相阻斷ELISA有什么區(qū)別嗎？讓我們一起來看看吧！一、本質(zhì)不同間接的酶標(biāo)抗體是二抗，與待檢抗體結(jié)合；阻斷酶標(biāo)抗體是一抗，與抗原結(jié)合。間接中底物降解的量與抗體量相等，阻斷底物降解量與抗體。二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)：是酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用zui廣的技術(shù)，其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應(yīng)板)表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，常用的ELISA法有雙抗體夾心法和間接法。OD值不同是因...
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