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RNA提取準(zhǔn)備工作及注意事項(xiàng)有什么？
2023-11-01
你知道RNA提取準(zhǔn)備工作及注意事項(xiàng)都有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、槍頭和EP管等的消毒滅菌1.用去離子水配制0.1%（千分之一）的DEPC（劇毒物），須在通風(fēng)櫥中小心使用，避光密閉4℃保存;DEPC水是用DEPC處理過(guò)并經(jīng)高溫高壓消毒的純水。經(jīng)檢測(cè)不含RNase、DNase和proteinase。2.將槍頭和EP管放入0.1%的DEPC內(nèi)，保證槍頭和EP管內(nèi)都充滿0.1%的DEP。3.避光、靜置、過(guò)夜（12-24h）4.裝槍頭和EP管的盒子不需要用DEPC浸泡，將槍頭或者...
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如何配置培養(yǎng)基？
2023-10-31
你知道該如何配置培養(yǎng)基嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)全程注意事項(xiàng)1.無(wú)菌操作是重中之重，細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)無(wú)菌條件比較苛刻，實(shí)驗(yàn)人在進(jìn)行整個(gè)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的無(wú)菌意識(shí)一定要強(qiáng)，否則一個(gè)不小心，發(fā)生細(xì)菌污染，輕則浪費(fèi)細(xì)胞，重則污染整個(gè)培養(yǎng)箱。2.實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入細(xì)胞房前應(yīng)該換上干凈的鞋子、白大褂、手套和口罩。3.所有耗材放入工作臺(tái)前都需用75%酒精進(jìn)行消毒，雙手進(jìn)入工作臺(tái)前也需要用75%的酒精進(jìn)行消毒。4.進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前應(yīng)先對(duì)工作臺(tái)進(jìn)行紫外滅菌30min以上，并將所有需要用到的耗材放到工作臺(tái)上一...
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如何選擇合適的培養(yǎng)基？
2023-10-31
培養(yǎng)細(xì)胞的重要環(huán)節(jié)有很多，其中很重要的一步就是為細(xì)胞選擇適合的生長(zhǎng)環(huán)境，為其選擇成分適合又營(yíng)養(yǎng)豐富的細(xì)胞培養(yǎng)基。細(xì)胞培養(yǎng)基是供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)、維持細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物，種類(lèi)一般包括經(jīng)典/基礎(chǔ)培養(yǎng)基、無(wú)血清培養(yǎng)基以及化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基等。那么該如何選擇合適的培養(yǎng)基呢？讓我們一起來(lái)看看吧！1.RPMI-1640培養(yǎng)基RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正?；驉盒栽錾陌准?xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。其它像K...
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影響WB實(shí)驗(yàn)的因素有什么？
2023-10-30
WB實(shí)驗(yàn)是分子生物學(xué)中最為常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)，那么你知道影響WB實(shí)驗(yàn)的因素有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、蛋白樣本制備1.蛋白質(zhì)的樣品制備注意以下問(wèn)題：（1）在合適的條件下，保持蛋白質(zhì)的最大溶解性和可重復(fù)性。（2）選擇合適的表面活性劑和還原劑，使其形成各自多肽的溶液。（3）盡量去除核酸，多糖，脂類(lèi)等分子的干擾，裂解完畢離心之后取中層澄清溶液時(shí)避免吸到底層沉淀和上層脂類(lèi)。（4）整個(gè)制作蛋白樣本的制備過(guò)程必須在低溫下進(jìn)行，避免細(xì)胞破碎釋放出各種酶類(lèi)，但是注意不要反復(fù)凍融。（5）所抽取樣...
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DMEM和1640培養(yǎng)基有哪些不同？
2023-10-30
培養(yǎng)基有很多不同的名字是因?yàn)楦鶕?jù)不同細(xì)胞的培養(yǎng)和應(yīng)用場(chǎng)景，培養(yǎng)基可以分為多種類(lèi)型，最常見(jiàn)的是DMEM、RPMI-1640、MEM等。這些培養(yǎng)基有自己的配方特點(diǎn)和適用范圍。那么你知道DMEM和1640培養(yǎng)基有哪些不同嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)是一種zui廣泛應(yīng)用的細(xì)胞培養(yǎng)基之一，它是由Eagle于1959年開(kāi)發(fā)出來(lái)的，后由Dulbecco進(jìn)行了改良。DMEM主要適用于肝臟、腎臟、肺、心臟等多種類(lèi)型的哺乳動(dòng)物...
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細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？
2023-10-27
你知道細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞污染和感染的處理方法細(xì)菌污染：如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)物出現(xiàn)混濁或異味，可能存在細(xì)菌污染。立即停止細(xì)胞培養(yǎng)，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)器具進(jìn)行嚴(yán)格的消毒和清潔，更換新的細(xì)胞培養(yǎng)物和培養(yǎng)基。真菌污染：真菌污染常常表現(xiàn)為細(xì)胞培養(yǎng)物表面的白色或黑色斑點(diǎn)。細(xì)胞培養(yǎng)器具應(yīng)che底清潔，細(xì)胞培養(yǎng)物可以添加抗真菌劑來(lái)預(yù)防和處理。細(xì)胞病毒感染：如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)物出現(xiàn)明顯的細(xì)胞溶解和變形，可能存在細(xì)胞病毒感染。可使用抗病du藥物來(lái)處理感染，并且進(jìn)行核酸檢測(cè)以...
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什么是液體培養(yǎng)基？它的組分有哪些？
2023-10-26
細(xì)胞培養(yǎng)，是人工創(chuàng)造與體內(nèi)生長(zhǎng)相似的環(huán)境，使細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。培養(yǎng)基是一切體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)，為細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝活動(dòng)提供了各種必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)培養(yǎng)基的來(lái)源和組成成分，它的發(fā)展經(jīng)歷了三個(gè)階段，分別是天然培養(yǎng)基階段、合成培養(yǎng)基階段以及無(wú)血清培養(yǎng)基階段。那么你知道什么是液體培養(yǎng)基嗎？它的組分是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！在20世紀(jì)50年代，當(dāng)時(shí)體外培養(yǎng)普遍直接采用組織凝塊、生物性液體和組織提取液，如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸液等，這就是天然培養(yǎng)基階段。由...
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液體培養(yǎng)基的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？
2023-10-26
液體培養(yǎng)基是最為常見(jiàn)的培養(yǎng)基類(lèi)型，它具有可進(jìn)行通氣培養(yǎng)或振蕩培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樗牧鲃?dòng)性便于精確控制培養(yǎng)基的溶液溫度、營(yíng)養(yǎng)濃度和氣體含量等；它對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)的附著能力要求小，細(xì)胞可快速擴(kuò)增；當(dāng)需要大量細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)也更經(jīng)濟(jì)高效。那么你知道液體培養(yǎng)基的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、液體培養(yǎng)基為什么顏色不一樣酚紅加量不同，導(dǎo)致顏色差異：DMEM＞MEM＞DMEM/F12＞RPMI1640＞F12&F10。二、培養(yǎng)基放冰箱里顏色變深空氣中CO2濃度低，培養(yǎng)基內(nèi)CO2會(huì)逐漸溢出，...
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